色谱法

项目简介

　　色谱分析法(Chromatography)简称色谱法或层析法，是一种物理或物理化学分离分析方法，该法利用某一特定的色谱系统(薄层色谱、高效液相色谱或气相色谱等系统)进行混合物中各组分的分离分析，主要用于分析多组分样品。

常见项目

　　气相色谱(GC)：以气体作为流动相的色谱设备，适合检测无机气体和小分子量有机物。

　　高效液相色谱(HPLC)：以流动相淋洗固定性实现有机物的分离。流动相一般为，水，乙腈，甲醇等。适用于有机物的分离与检测。

　　凝胶渗透色谱(GPC)：凝胶具有化学惰性，它不具有吸附、分配和离子交换作用。让被测量的高聚物溶液通过一根内装不同孔径的色谱柱，柱中可供分子通行的路径有粒子间的间隙(较大)和粒子内的通孔(较小)。当聚合物溶液流经色谱柱(凝胶颗粒)时，较大的分子(体积大于凝胶孔隙)被排除在粒子的小孔之外，只能从粒子间的间隙通过，速率较快;而较小的分子可以进入粒子中的小孔，通过的速率要慢得多;中等体积的分子可以渗入较大的孔隙中，但受到较小孔隙的排阻。介乎上述两种情况之间。经过一定长度的色谱柱，分子根据相对分子质量被分开，相对分子质量大的在前面(即淋洗时间短)，相对分子质量小的在后面(即淋洗时间长)。自试样进柱到被淋洗出来，所接受到的淋出液总体积称为该试样的淋出体积。当仪器和实验条件确定后，溶质的淋出体积与其分子量有关，分子量愈大，其淋出体积愈小。

　　高温凝胶渗透色谱(高温GPC)：适用于常温难以溶解的样品，例如超高分子量的聚乙烯。

结果展示

常见问题

　　1. 气相色谱法的一些常用术语及基本概念解释? 

　　(1)相、固定相、流动相：一个体系中的某一均匀部分称为相;在色谱分离过程中，固定不动的一相称为固定相;通过或沿着固定相移动的流体称为流动相;

　　(2)色谱峰：物质通过色谱柱进到鉴定器后，记录器上出现的一个个曲线称为色谱峰;

　　(3)基线：在色谱操作条件下，没有被测组分通过鉴定器时，记录器所记录的检测器噪声随时间变化图线称为基线;

　　(4)峰高与半峰宽：由色谱峰的浓度极大点向时间座标引垂线与基线相交点间的高度称为峰高，一般以h表示。色谱峰高一半处的宽为半峰宽，一般以×1/2表示;

　　(5)峰面积：流出曲线(色谱峰)与基线构成之面积称峰面积，用A表示;

　　(6)死时间、保留时间及校正保留时间：从进样到惰性气体峰出现极大值的时间称为死时间，以td表示。从进样到出现色谱峰最高值所需的时间称保留时间，以tr表示。保留时间与死时间之差称校正保留时间，以Vd表示;

　　(7)死体积，保留体积与校正保留体积：死时间与载气平均流速的乘积称为死体积，以Vd表示，载气平均流速以Fc表示，Vd=tdxFc。保留时间与载气平均流速的乘积称保留体积，以Vr表示，Vr=trxFc;

　　(8)仪器噪音：基线的不稳定程度称噪音;

　　2. 气相色谱分析中柱长、柱内径、柱温、载气流速、固定相、进样等操作条件对分离的影响?

　　(1)柱长、柱内径：柱管增长，可改善分离能力，短则组分留出的快些;柱内径小分离效果好，柱内径大处理量大，但柱内径过大，将导致单体不能均匀地分布在色谱柱中，一般柱内径3-6mm，柱长1-4m;

　　(2)柱温：影响分离效能和分析速度，选择柱温是根据混合物的沸点范围，固定液的配比和鉴定器的灵敏度。提高柱温可缩短分析时间;降低柱温可使色谱柱选择性大，有利于组分的分离和色谱柱稳定性提高，延长柱寿命。一般采用等于或高于数十度于样品的平均沸点的柱温比较合适，对易挥发样用低柱温，不易挥发采用高柱温;

　　(3)载气流速：一般流速高，色谱峰窄;反之则宽些，但不宜过高或过低。要求平稳，一般流速在10-100ml/min之间;

　　(4) 固定相(固体吸附剂+涂有固定液的担体)：固定相粗细(一般40-60、60-80、80-100目，对于同等长度的柱子，颗粒细的分离效率更高);固定液含量(它与担体的重量比一般15-25%，过大影响分离，过小使色谱峰拖尾);

　　(5) 进样：一般进样快，进样量小，进样温度高，分离效果好;常规液体1-20μl，气体0.1-5ml;

　　3. 高效液相色谱(HPLC)拖尾峰可能是什么原因导致的?

　　(1) 筛板阻塞：柱子两头的过滤筛板如果堵塞，样品就会在筛板部分受阻而形成时间延迟，使得样品在柱后流出时峰型形成拖尾。需要通过反冲色谱柱，或者更换筛板;

　　(2)色谱柱塌陷：是指色谱柱由于其它原因引起了柱效率丧失，不能对物质形成保留，使得物质不在固定相上保留而随流动相流出，但是又还有一点柱效，因此形成拖尾。需要重新填充色谱柱或者更换色谱柱;

　　(3) 有污染：即样品不在同一起跑线起跑，从后面开始跑得到达终点稍晚，表现出拖尾。更换色谱柱或者采用有机溶剂梯度洗脱1h以上，以冲洗柱子;

　　(4) 流动相PH值选择错误：如某PH下有的样品存在分子型和离子型的动态平衡，离子型的陆续向分子型转化就会表现出拖尾。调节PH值可抑制分子解离，改善拖尾，对于碱性化合物，相对较低的PH值更有利于得到对称峰;

　　4. GPC测试出来的分子量和理论得分子量偏差很大，为什么?

　　GPC测得的是相对分子量，分子量结果对标样有很大依赖性，每种流动相都有对应的一种标准物质作出的标准曲线，样品测试结果要跟标曲比较，然后得出相对分子量，跟理论结果会有偏差属于正常的。

　　5. GPC水相测试的话，流动相可以是硝酸钠溶液么?测试的设备型号以及条件是什么呢?

　　流动相：0.2M NaNO3+0.01M NaH2PO4 PH=7;

　　水相GPC 一般都是水+缓冲液配备的流动相;

　　仪器：waters1525 检测器：waters1424

　　流速：1ml/min 温度：35℃

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